蛋白分子量測定
分子量是有機化合物基本的理化性質參數。分子量正確與否往往代表著所測定的有機化合物及生物大分子的結構正確與否。分子量也是多肽、蛋白質等鑒定中首要的參數,也是基因工程產品報批的重要數據之一。
基質輔助激光解析電離飛行時間質譜(maldi-tof-ms)是近年來發展起來的一種新型的軟電離生物質譜,具有樣品消耗量少、靈敏度高、測定速度快、易于實現高通量、可對蛋白進行大規模的鑒定及生物大分子的分子量測定等特點,為蛋白質研究提供了一種強有力的分析測試手段。簡便,直觀,可直接對大分子混合物進行測定,并且基本不產生碎片峰是maldi-tof-ms的優勢,因此這項技術在生物大分子分子量測定中得到廣泛應用。maldi-tof-ms儀器主要由兩部分組成:基質附助激光解吸電離離子源(maldi)和飛行時間質量分析器(tof)。maldi的原理是用激光照射樣品與基質形成的共結晶薄膜,基質從激光中吸收能量傳遞給生物分子,而使生物分子電離的過程。它是一種軟電離技術,適用于混合物及生物大分子的測定。tof的原理是離子在電場作用下加速飛過飛行管道,根據到達檢測器的飛行時間不同而被檢測即測定離子的質荷比(m/z)與離子的飛行時間成正比,從而實現對離子的檢測。maldi-tof的準確度高達0.1%-0.01%,遠遠高于目前常規應用的sds電泳與高效凝膠色譜技術,目前可測定生物大分子的分子量范圍為700-600000da。
百泰派克公司采用bruker公司的ultraflextreme™ maldi tof/tof質譜系統,為廣大科研工作者提供生物分子分子量測定服務,用于分析目標蛋白或多肽的分子量,檢測蛋白二聚體,以及對樣品純度進行大體評估。
樣品要求
1. 樣品的需要量約為10-50ug;
2. 樣品純度>90%;
3. 樣品準備過程中盡量避免表面活性劑,例如sds、triton-x等的使用;鹽濃度,例如tris等也盡量降低;
4. 如果您在準備樣品的過程中必須要用到表面活性劑以及較高的鹽濃度,我們收到您的樣品后會首先通過相關實驗對上述化合物進行去除,然后進行后續的分子量測定。
注意
膠粒樣品或者轉移到pvdf膜上的樣品不適合于分子量測定實驗。
研究案例
在 maldi-tof 的應用過程中,除了可以檢測樣品的分子量,還能提供樣品本身純度的信息。如下圖所示,樣品在理論分子量 1046.6da范圍出現明顯的信號峰,且樣品純度較好。
分子量測定研究案例
分子量測定研究案例
中/英文項目報告
在技術報告中,百泰派克會為您提供詳細的中英文雙語版技術報告,報告包括:
1. 實驗步驟(中英文)
2. 相關的質譜參數(中英文)
3. 質譜圖片
4. 原始數據
5. 蛋白質分子量和純度分析結果